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熒光探針和熒光染料凍干防護
日期：2020-07-12瀏覽：670次
凍干對熒光探針和熒光染料有防護作用，凍干可防止探針和染料降解，提高反應的靈敏度和特異性。接著介紹一下熒光探針和熒光染料的特性。熒光探針是PCR擴增時在加入一對引物的同時加入熒光探針，探針完整時，報告基團發射的熒光信號被淬滅基團吸收；PCR擴增時，Taq酶的5'－3'外切酶活性將探針酶切降解，使報告熒光基團和淬滅熒光基團分離，從而熒光監測系統可接收到熒光信號，每擴增一條DNA鏈，就有一個熒光分子形成，實現了熒光信號的累積與PCR產物形成完全同步。熒光染料是在PCR反應體系中，加入過量SYBR熒光染料，SYBR熒光染料非特異性地摻入DNA雙鏈后，發射熒光信號，而不摻入鏈中的SYBR染料分子不會發射任何熒光信號，從而保證熒光信號的增加與PCR產物的增加完全同步。SYBR僅與雙鏈DNA進行結合，因此可以通過溶解曲線，確定PCR反應是否特異。低溫預凍，低溫真空干燥，過程隔離氧氣水分，凍干法可徹底防止熒光物質降解。試劑凍干機Pilot3-6T IVD方面應用示例（熒光PCR）：
- 探針、底物、引物原料要求確定。
- 凍干溶液配方開發，采用正交法或響應曲面法進行輔料篩選。
- 選擇適合的包材和模具。
- 設計凍干曲線配合輔料篩選。
- 確定配方及工藝。
- 穩定性測試。
- 根據穩定性測試結果修正工藝或配方。
- 整個環節注意環境、設備、人員的結合。
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